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論液相色譜的溶劑效應(yīng)

點擊次數(shù):2406 發(fā)布時間:2018-07-30
  論液相色譜的溶劑效應(yīng)
  一 通常概念及其局限
  目前*的溶劑效應(yīng)的理解是樣品溶劑度大于流動相時造成色譜峰變形的現(xiàn)象。比如100%純乙腈溶解樣品,注入流動相為乙腈—水(18:82)的反相系統(tǒng)中,會造成峰分叉或拖尾的現(xiàn)象。但是這種概念不能解釋其他由于所選稀釋劑導(dǎo)致的峰變形現(xiàn)象,如溶出樣品,在pH6.8溶出介質(zhì)中取出的樣品注入某些緩沖鹽—有機(jī)相系統(tǒng)中保留時間不穩(wěn)定及色譜峰變形。
  二 概念擴(kuò)展與詳述
  鑒于許多由稀釋劑導(dǎo)致的色譜峰變形的現(xiàn)象不能用目前的溶劑效應(yīng)解釋,我覺得有必要將溶劑效應(yīng)的概念延伸。溶劑效應(yīng),顧名思義,就是由于樣品中某些組分在稀釋劑與流動相所處的狀態(tài)的較大差異導(dǎo)致的色譜行為表現(xiàn)異常的情況。
  1 洗脫能力的差異
  目前一般意義上的理解說的就是這種情況,不再贅述。
  2 電離狀態(tài)的差異
  藥物活性成分一部分都是能離子化的樣品,原料藥都是成鹽狀態(tài),如鹽酸達(dá)卡他韋,帕瑞昔布鈉等。此類樣品它們都會電離,且基本上都不是*電離,一部分是離子化狀態(tài),一部分是分子狀態(tài),兩種不同的狀態(tài)在流動相和固定相之間的分配是不一樣的。
  在反相系統(tǒng)中,分子狀態(tài)和固定相結(jié)合的更緊密,保留更,離子狀態(tài)更親和于流動相,保留較弱。如果樣品在稀釋劑中的電離狀態(tài)和流動相的電離狀態(tài)有非常大的差異,例如上文提到的溶出樣品,樣品的稀釋劑是pH6.8溶出介質(zhì),緩沖鹽是10Mm/l的磷酸鹽溶液(pH3.0),這就可能發(fā)生保留時間不穩(wěn)定及色譜峰變形的現(xiàn)象。樣品假如是堿性樣品,它在pH6.8溶出介質(zhì)中大多未電離,而在磷酸鹽溶液(pH3.0)有一部分是電離狀態(tài),在樣品溶液和流動相接觸混合的過程中,需要一段時間將電離狀態(tài)緩沖至流動相所處的狀態(tài)。這個時間如果較長,就會導(dǎo)致色譜行為的異常。
  從以上的分析,應(yīng)該可以看出,解決類似問題的辦法有三個,樣品溶液用流動相稀釋,減少進(jìn)樣量,或者增流動相緩沖能力。增加緩沖能力的做法請參見我的《方法開發(fā)緩沖鹽使用指導(dǎo)原則》?
  3 溶解性的差異
  做與參比制劑的溶出曲線對比試驗中,經(jīng)常會在溶出介質(zhì)中加入表面活性劑,我想有多人就會發(fā)現(xiàn)樣品的保留時間飄忽不定。其實根本原因和前二者差不多,都是由于樣品在稀釋劑中與固定相的分配系數(shù)與流動相與固定相的分配系數(shù)差異較大導(dǎo)致。流動相在將樣品溶液稀釋至與自身能力相差不大的情況需要一定的時間,該時間的長短在色譜行為上會有體現(xiàn)。目前可行的解決辦法有兩個,在流動相中加入同樣的表面活性劑,或者提有機(jī)相比例。
  4 總結(jié)
  還要其他方面的差異,由于本人精力及經(jīng)歷的限制,就不一一列舉。但是都可以參照上述的情況解釋并且尋找解決辦法。

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